動物外周血淋巴細胞分離液的注意事項
細胞分離液使用的注意事項:
1.開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免微生物污染。。
2.分離液使用時應始終保持室溫(18℃~25℃),如室內溫度較低,可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。
3.血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血2 h以內),為保持淋巴細胞的活性,應避免冷凍和冷藏。
4.稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液,其成分會導致血細胞凝集,大大降低細胞得率及純度。
5.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導致細胞掛壁影響分離效果。
6.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會影響分離效果,可以調節離心轉數和離心時間,摸索最佳的分離條件。
7.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加;吸取過多的血漿層可能會導致淋巴細胞中血漿蛋白及血小板污染。
8.如果要進一步對分離的細胞進行培養,那在收集血液和分離過程中,注意無菌操作,避免微生物污染。
9.不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同,用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。