此法曾用于乳癌細胞的培養,具體程序是:
?。?)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培養基細胞一次,然后再換成新的混合液繼續消化,并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶,到半數細胞脫落下來后,便立即停止消化;
?。?)把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養液置溫箱中培養;向原瓶內也補加新的培養基液繼續培養。用此法處理后,成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落。經過幾次反復處理,可能把成纖維細胞除凈。
本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點,通過消化進行選擇。
?。?)可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,當發現成纖維細胞被除掉后,即終止消化;
(2)用Hanks洗滌處理一次后,更換新培養基液,繼續培養,可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈,可再次重復。